Configuración de una centrífuga de laboratorio para la detección de virus

La centrifugación es una técnica fundamental en el procesamiento y aislamiento de diferentes muestras de virus. En el mercado existen numerosos kits de aislamiento que requieren de esta técnica para la obtención de resultados. 

La configuración de la Centrifuga adecuada permite, además de garantizar óptimos  resultados durante el aislamiento viral,  optimizar los costos del procedimiento.

A continuación se resume un ejemplo de flujo de trabajo en tres etapas para detección de virus y una guía rápida para identificar la correcta configuración de la centrifuga para cada una de las etapas del proceso.

Etapa 1: Recolección de sobrenadante


Esta etapa consiste en la toma de muestras, la agitación de éstas en un vortex y la posterior centrifugación de estas muestras para recolectar el sobrenadante, el cual se transfiere para purificar los ácidos nucleicos virales. Es un proceso generalmente manual, que debe realizarse con cuidado, y un aspecto a considerar para la configuración de su equipo, es que la centrifugación se realiza por 5 minutos a 2.000 xg

Alternativas de rotores y buckets para la recolección de sobrenadante:

Rotor centrifuga transferencia GRA-15/10-12
Rotor centrifuga transferencia GRA-15-16A
Bucket centrifuga transferencia GLB-15-8-100
Adaptador centrifuga transferencia GAM-15-12 (r250)
Adaptador centrifuga transferencia GAM-15-20 (r750)
Adaptador centrifuga transferencia GAM-15-19 (750)

Etapa 2: Preparación de ácidos nucleicos (ARN)

Para el proceso de aislamiento y purificación de ácidos nucleicos (ARN) pueden aplicarse diferentes métodos. Uno de los más utilizados emplea Tubos de microfiltro, los cuales son sometidos al proceso de centrifugación (De acuerdo con protocolo de kits MN):

  • Para el binning: centrifugación por 1 min a 8,000 xg.
  • Para el lavado:
    • centrifugación por 1 min a 8,000 xg, dos veces.
    • centrifugación por 3 min a 11,000 xg.
  • Para eluir: centrifugación por 1 min a 11,000 xg.

Alternativas de rotores para la preparación de ARN por tubos de microfiltro:

Rotor centrifuga RNA GRF-m2.0-12
Rotor centrifuga RNA GRE-M-m2.0-24
Rotor centrifuga RNA GRE-M-m2.0-36

Etapa 3: Reacción PCR

Esta etapa consiste en la amplificación del material del ARN aislado del virus. La PCR es una prueba que presenta un grado de complejidad, por lo que necesita personal entrenado y preparado para su realización.

Algunos aspectos clave:

  • El equipo de cuantificación PCR en tiempo real se utiliza generalmente con formato de microplacas de 96 pocillos.
  • Antes de iniciar la reacción de PCR, se realiza una centrifugación rápida de microplacas.
  • Ocasionalmente, en caso de que el número de test no sea grande, se utiliza el formato de tiras PCR.

Alternativas de rotores para tubos de PCR y microplacas:

Rotor centrifuga PCR GRF-m0.2-32
Rotor centrifuga PCR GRF-M-m0.2-64
Rotor centrifuga PCR GRD-M-mw-2
Rotor centrifuga PCR GRS-S-mw-2

Rotor centrifuga PCR GLP-mw-r750

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¿Cómo configurar su centrífuga de laboratorio?

La centrifugación es un  proceso mecánico por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza centrífuga (fuerza  rotativa) la cual imprime a la mezcla  una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.

Tipos de centrifugación

  • Centrifugación de escala preparativa (más usada): Se utiliza para aislar partículas para su aprovechamiento posterior ,según la velocidad de sedimentación (centrifugación diferencial), la masa (centrifugación zonal) o la densidad (centrifugación isopícnica).
  • Centrifugación de escala analítica: Permite determinar propiedades físicas como la velocidad de sedimentación o el peso molecular.

Tipos de Rotor

  • Rotores de ángulo fijo: sostienen los tubos en un ángulo con respecto al eje de rotación. El ángulo varía según los diferentes rotores, pero lo más común es entre 25° a 40
    • La sedimentación es más rápida
    • Las partículas se recolectarán parcialmente a lo largo del lateral del tubo, lo que dificulta la recolección.
Rotor de Ángulo Fijo
  • Rotores basculantes: Los tubos se colocan en un dispositivos (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca en disposición perpendicular al eje de giro. Así pues los tubos siempre giran situados perpendicularmente al eje de giro. 
Rotor basculante

Preguntas para configurar una centrífuga de laboratorio

  • Aplicación
  • Velocidad de trabajo (en RPM o RFC): variable o fija
  • Tipo de rotor: fijo o basculante
  • Tipo de tubo
  • Cantidad de tubos
  • Volumen de trabajo
  • Temperatura de trabajo: requiere o no requiere refrigeración
  • Espacio físico
Buckets
Adaptadores

Tipos de Centrífugas

  • Microcentrífugas: máximo 17.000 RPM
  • Centrífugas clínicas de baja velocidad: máximo 4.000 RPM
  • Centrífugas multipropósito de alta velocidad: máximo 16.000 RPM
  • Centrífugas de alta capacidad y alta velocidad: máximo 22.000 RPM

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