Qué es y para qué sirve
La muestra gira en un rotor y las partículas más densas sedimentan hacia el fondo del tubo. Se usa para separar plasma y suero de las células de la sangre, recoger células de un cultivo, concentrar precipitados, clarificar suspensiones y preparar extractos de ácidos nucleicos y proteínas. El mismo principio, a distinta velocidad y con distinto rotor, cubre desde el tubo de hematocrito hasta la separación de partículas muy pequeñas en una ultracentrífuga.
Guía de configuración de una centrífuga
Una centrífuga se arma por capas: el equipo, el rotor, los capachos o adaptadores y los tubos. Cada capa limita a la siguiente: el rotor fija cuántos tubos entran y la fuerza máxima; el adaptador, qué tubo cabe; y el tubo, cuánta fuerza soporta.
1. Tipo de equipo
- Microcentrífuga. Para microtubos de 0,2 a 2 mL y tiras PCR, en poco espacio: microcentrífugas.
- Clínica de mesa. Tubos de sangre, orina y suero en la rutina, a baja velocidad: AHN CLC-01 y CLC-02, Labtech Gyrozen 406 y 416 y Selecta Cencom II y Centro BL.- Multipropósito de mesa. Un mismo equipo con rotores intercambiables, desde microtubos hasta frascos: AHN UC-01, Everfuge Pro1406 y Pro1506R, Selecta Centromix, Selecta Mixtasel y Sigma 2-7 y 2-16.
- Refrigerada. Mantiene la muestra fría mientras gira. Se elige para proteínas, ácidos nucleicos y células, y cuando se trabaja con rotores de ángulo fijo a alta velocidad, que calientan la cámara: AHN RC-01, Labtech 624R, Sigma 3-16 y 3-18 y Selecta Centronic y Centrofriger.
- Alta velocidad de mesa. Para sedimentar fracciones finas, como membranas, proteínas o ácidos nucleicos: Sigma 3-30, Labtech Gyrozen de alta velocidad, Everfuge Pro2515 y Pro2615, Everfuge Pro2418 y Pro2422 y Selecta Meditronic y Medifriger. Si hace falta más fuerza: centrífugas de alta velocidad de piso y la ultracentrífuga Hanil Ultra 5.0.
- Gran capacidad. Frascos de 500 mL a 1 L por posición, o muchos tubos por corrida: Sigma 4-16, Sigma 6-16, Sigma 4-5L, Selecta Macrotronic y Macrofriger.
- Banco de sangre. Centrífugas refrigeradas para fraccionar bolsas de sangre en plasma, plaquetas y otros componentes: Selecta BLT Blood, Everfuge Pro1905R y Labtech 1096R. Otros equipos del área están en hematología y banco de sangre.
- De piso. Cuando la carga no cabe en un equipo de mesa: grandes volúmenes, bolsas o muchos tubos. Pesan cientos de kilos, así que conviene revisar el acceso y el espacio antes de la entrega: Labtech 1096R y Everfuge Pro1905R.
- Microhematocrito. Para capilares de hematocrito: centrífugas de microhematocrito. La Selecta Centronic acepta además un cabezal de microhematocrito.
- Usos especiales. Placas PCR (AHN MC-04), portátil con batería y automatizada para brazo robótico de Everfuge, y centrífugas manuales de Selecta para docencia o sin electricidad.
2. Rotor basculante o de ángulo fijo
- Basculante (oscilante). Los capachos giran hasta quedar horizontales: el sedimento queda parejo en el fondo del tubo y las fases se separan limpias. Es el rotor de los tubos de sangre, los frascos grandes, las bolsas y las microplacas. En el mismo equipo trabaja a menos velocidad que un rotor de ángulo fijo.
- Ángulo fijo (angular). El tubo va inclinado y la partícula recorre menos camino: sedimenta más rápido y el rotor alcanza más velocidad y fuerza. Es el rotor de los microtubos y de los tubos de 15 y 50 mL cuando el protocolo pide alta fuerza o un pellet compacto.
- Cuál elegir. Para separar fases o leer un nivel (sangre, suero), basculante. Para fuerza o rapidez con volúmenes chicos, ángulo fijo. Muchos equipos aceptan los dos, según el rotor que se pida con el equipo.
- Otros rotores. Tambor para cassettes de tubos PCR (Sigma 3-16 y 3-18), portaplacas para microplacas y colgadores en las centrífugas manuales.
- El rotor se elige con el equipo. En muchas centrífugas el rotor no viene incluido: se define según el tubo y la fuerza, y se pide junto con el equipo.
3. Capachos, cubetas y adaptadores
- En un rotor basculante los tubos no van sueltos: van dentro de capachos (también llamados cubetas o vasos) que cuelgan del rotor. El capacho fija el volumen máximo por posición, por ejemplo 750 mL en la Sigma 4-5L.
- Dentro del capacho van los adaptadores o reductores, que ajustan el diámetro y el largo del tubo. Con distintos adaptadores, el mismo capacho recibe tubos cónicos de 15 o 50 mL, tubos de sangre o microtubos.
- En un rotor de ángulo fijo, el reductor va dentro de la cavidad para usar un tubo más chico que el previsto.
- Por lo general, rotores, capachos y adaptadores se entregan sin tubos. Revise la tabla de accesorios de cada equipo, por ejemplo la de la Sigma 6-16 o la de la Selecta Macrotronic y Macrofriger.
4. Tubos
- El tubo tiene que calzar en el adaptador (diámetro y largo) y soportar la fuerza del rotor. Cada tubo indica su fuerza máxima: los tubos AHN de 50 mL sin faldón soportan hasta 20.000 ×g y los autoportantes, con faldón, hasta 7.000 ×g. Si el rotor da más, se baja la velocidad.
- Hay tubos de vidrio, polipropileno y policarbonato, y frascos con tapa rosca que se pueden esterilizar en autoclave: tubos de centrífuga AHN de 15 y 50 mL, tubos y recipientes Selecta y tubos, criotubos y racks.
- Los tubos se cargan balanceados, en posiciones opuestas y con el mismo peso, sin pasar el volumen máximo del capacho o del rotor.
5. Fuerza (×g) y velocidad (rpm)
- Los protocolos piden fuerza (×g o RCF), no rpm. La fuerza depende de la velocidad y del radio del rotor: a las mismas rpm, un rotor más grande da más ×g.
- Por eso el mismo equipo da distinta fuerza según el rotor: la AHN UC-01 llega a 4.500 rpm y, según el rotor, da de 2.355 a 3.485 ×g.
- La rutina clínica (sangre, orina, cultivos) trabaja a baja velocidad, hasta unos 5.400 ×g. Precipitar ácidos nucleicos, proteínas o partículas finas pide alta velocidad.
- Más detalle en qué son las RPM y la RCF y en rotor de ángulo fijo o basculante.
