Cromatografía: La importancia de la temperatura

Muchas cosas pueden afectar la forma de los peaks y los tiempos de retención en la Cromatografía, como el tamaño de la columna, los aditivos de la fase móvil y las características del analito. La temperatura de la columna es un factor importante y a menudo pasado por alto cuando se trata del desarrollo de métodos de Cromatografía. Esto se debe a que la temperatura de la columna puede afectar la forma del peak, la retención y la contrapresión. En cuanto al tiempo de retención, a medida que aumenta la temperatura de la columna, el tiempo de retención disminuye. Esto se debe a que cuanto mayor es la temperatura de la columna, más rápido se intercambian los analitos entre la fase estacionaria de la columna y la fase móvil. 

A medida que este proceso se vuelve más rápido, los analitos no se retienen tanto tiempo, lo que da como resultado tiempos de retención más cortos y, a menudo, formas de peaks más eficientes. Sin embargo, se debe tener en cuenta que el aumento de la temperatura no afecta a todos los analitos por igual, lo que significa que el impacto del factor de retención puede ser diferente para cada analito. 

Sin embargo, si hay problemas para separar los peaks o se desea obtener una mejor resolución entre los peaks, podría ser útil probar una temperatura de columna más baja. Así como aumentar la temperatura de la columna puede hacer que los tiempos de retención sean más cortos porque la velocidad de las interacciones en la columna ha aumentado, bajar la temperatura hará lo contrario, lo que a su vez puede ayudar con la resolución de los analitos. También hay algunos analitos que muestran una mejor separación con una temperatura de columna más baja. Por ejemplo, algunos cannabinoides como CBDA, CBGA, CBC y THCA muestran la mejor resolución a una temperatura más baja. 

Si bien lo anterior es cierto en la mayoría de los casos, hay ciertos casos en los que una temperatura más alta funciona mejor tanto para tiempos de retención más cortos como para la resolución del analito. Los epímeros de alcaloides del cornezuelo de centeno y los compuestos PFAS muestran mejores resultados con una temperatura de columna más alta. 

La temperatura de la columna de Cromatografía también puede afectar su contrapresión. Debido a que la alta viscosidad de la fase móvil puede causar altas contrapresiones, aumentar la temperatura de la columna puede ayudar a disminuir la viscosidad de la fase móvil y, por lo tanto, reducir la contrapresión. 

Si bien las temperaturas más altas de la columna pueden ayudar con la forma de los peaks y los tiempos de retención más cortos, es importante no superar la temperatura recomendada para la columna. El uso de una temperatura demasiado alta en una columna puede reducir drásticamente su vida útil. Por lo general, se puede encontrar la temperatura máxima para cada columna en la guía de uso del fabricante.

Por lo tanto, aunque a menudo se pasa por alto, la temperatura de la columna es un parámetro importante para optimizar cada vez que se configura un método. Puede tomar un tiempo de prueba y error para encontrar la temperatura de columna correcta para los analitos en cada método, pero hay que considerar este parámetro en el desarrollo temprano del método, ya que puede conducir a una mejor resolución y métodos más eficientes.