Electroforesis: ¿Qué tipo de tinción usar?

La electroforesis es un procedimiento de laboratorio muy utilizado para identificar y separar macromoléculas. Fue primeramente observado a principios de 1800 por científicos de una universidad en Moscú. Como muchos descubrimientos, fue accidental, pero ha resultado ser muy útil para muchos escenarios de investigación. Al aplicar electricidad, los técnicos utilizan las cargas negativas y positivas de las partículas para hacerlas migrar por una matriz porosa, como un gel de agarosa.

A pesar de que estas moléculas son “macro”, aún así son demasiado pequeñas para ser observadas por el ojo humano, por lo que para esto, se requiere de la tinción, un grupo de tinturas que permiten que se visualicen los caminos que estas partículas toman. A partir de esto, se pueden capturar imágenes para documentar los resultados.

Tinción en gel de ADN.

El Bromuro de etidio (EtBr) es la tinción de ADN más conocida y más utilizada. Es un agente intercalante que se une al ADN y tiene un aumento de 20 veces en la fluorescencia cuando es expuesto a la luz ultravioleta. El Bromuro de etidio es además la tinción de ADN más económica, lo que lo hace ideal para muchos laboratorios. Adicionalmente, requiere de luz ultravioleta para ser visualizado, pero esto conlleva daño molecular, lo que presenta un problema cuando el ADN se utiliza en aplicaciones posteriores como el clonado, 

Tinción en gel de proteínas.

Similar al gel de ADN, hay muchas opciones para la tinción con gel de proteínas, siendo los dos más comunes Coomassie Azul Brillante y Tinción de Plata. Coomassie es una tinción aniónica, que se une de manera no específica a las proteínas. Las bandas se visualizan de color azul, una vez removido el exceso. Este método es el más prevalente para la tinción con proteínas debido a la facilidad de uso y costo asequible. 

Por otro lado, la Plata es más sensible que el Coomassie para detectar proteínas en una cantidad relativamente baja. Esta sensibilidad, sin embargo, la hace más costosa, ya que la tinción de Plata también puede unirse a polisacáridos y ácidos nucleicos, produciendo bandas espurias en un gel teñido de plata.