La centrifugación es una técnica fundamental en el procesamiento y aislamiento de diferentes muestras de virus. En el mercado existen numerosos kits de aislamiento que requieren de esta técnica para la obtención de resultados.
La configuración de la Centrifuga adecuada permite, además de garantizar óptimos resultados durante el aislamiento viral, optimizar los costos del procedimiento.
A continuación se resume un ejemplo de flujo de trabajo en tres etapas para detección de virus y una guía rápida para identificar la correcta configuración de la centrifuga para cada una de las etapas del proceso.
Etapa 1: Recolección de sobrenadante
Esta etapa consiste en la toma de muestras, la agitación de éstas en un vortex y la posterior centrifugación de estas muestras para recolectar el sobrenadante, el cual se transfiere para purificar los ácidos nucleicos virales. Es un proceso generalmente manual, que debe realizarse con cuidado, y un aspecto a considerar para la configuración de su equipo, es que la centrifugación se realiza por 5 minutos a 2.000 xg
Alternativas de rotores y buckets para la recolección de sobrenadante:
Para el proceso de aislamiento y purificación de ácidos nucleicos (ARN) pueden aplicarse diferentes métodos. Uno de los más utilizados emplea Tubos de microfiltro, los cuales son sometidos al proceso de centrifugación (De acuerdo con protocolo de kits MN):
Para el binning: centrifugación por 1 min a 8,000 xg.
Para el lavado:
centrifugación por 1 min a 8,000 xg, dos veces.
centrifugación por 3 min a 11,000 xg.
Para eluir: centrifugación por 1 min a 11,000 xg.
Alternativas de rotores para la preparación de ARN por tubos de microfiltro:
Rotor centrifuga RNA GRF-m2.0-12
Rotor centrifuga RNA GRE-M-m2.0-24
Rotor centrifuga RNA GRE-M-m2.0-36
Etapa 3: Reacción PCR
Esta etapa consiste en la amplificación del material del ARN aislado del virus. La PCR es una prueba que presenta un grado de complejidad, por lo que necesita personal entrenado y preparado para su realización.
Algunos aspectos clave:
El equipo de cuantificación PCR en tiempo real se utiliza generalmente con formato de microplacas de 96 pocillos.
Antes de iniciar la reacción de PCR, se realiza una centrifugación rápida de microplacas.
Ocasionalmente, en caso de que el número de test no sea grande, se utiliza el formato de tiras PCR.
Alternativas de rotores para tubos de PCR y microplacas:
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Rotor basculante de 4 posiciones con buckets para 32 tubos tipo vacutainer de 10mL
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Configuración Rotor de ángulo fijo con tapa de aluminio para 8 tubos de 50 ㎖
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Compatible con las marcas comúnmente utilizadas: Sartorius, Brand, CAPP, Eppendorf, Gilson.
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